Explicado: Cinco etapas para detectar o coronavírus (COVID-19)

O processo foi explicado ao The Indian Express pelo Dr. V Ravi, Professor Sênior e Chefe do Departamento de Neurovirologia, NIMHANS.

Sangue falso é visto em tubos de ensaio marcados com o coronavírus (COVID-19) nesta ilustração tirada em 17 de março de 2020. (Reuters)

O Dr. V Ravi, Professor Sênior e Chefe do Departamento de Neurovirologia, NIMHANS, explica o processo de detecção do coronavírus para esse site . Aqui estão as cinco etapas:

Recolha e transporte

O centro de testes coleta cotonetes das cavidades nasais e da parte posterior da garganta (faringe) e coloca as amostras em um meio de transporte de vírus, que contém sais balanceados e albumina para evitar que o vírus se desintegre. A amostra é então transportada em armazenamento refrigerado para o laboratório de testes.

Extração de RNA viral

Coronavírus como o SARS-CoV (que surgiu na China em 2002-03), MERS-CoV (que apareceu na Arábia Saudita em 2012) ou o atual SARS-CoV-2 que causou a pandemia COVID-19, têm grandes , genomas de RNA de fita simples. O laboratório de teste extrai o RNA das amostras, usando kits disponíveis comercialmente (como aqueles feitos por empresas como a QIAGEN).

Colocando O RNA na mistura de PCR

O RNA extraído é adicionado a uma mistura de reação em cadeia da polimerase (PCR). Isso inclui a ‘master mix’, que contém uma enzima ‘transcriptase reversa’ que converte o RNA em DNA. Master mix contém Taq polimerase, a enzima que cria cópias do DNA, nucleotídeos, bem como outros elementos, como magnésio - um íon do qual é necessário para amplificar o DNA.

A mistura de PCR também contém 'reagentes', como 'primers' e 'sondas'. Os primers são fitas específicas de DNA projetadas para se ligar ao DNA a ser copiado; sondas são usadas para detectar a sequência específica na amostra de DNA. A OMS recomendou primers e sondas específicos para o teste de COVID-19.

Finalmente, a mistura de PCR consiste em um gene de manutenção - um gene humano normal (RNase P) que é usado para garantir que as amostras foram coletadas corretamente e o RNA extraído.

AmpLificação do DNA viral

A amostra, em sua mistura de PCR, é colocada em tubos ou placas, que são colocados em um termociclador que é utilizado para conduzir o processo de PCR.

Primeiro, o RNA é convertido em DNA. Então, o processo de cópia dos genes começa. O termociclador aquece e resfria a mistura com a amostra, alternando entre três temperaturas - para derreter o DNA para separar as duas fitas, para o primer se ligar ao DNA e para sintetizar uma nova fita - tudo dentro de um ciclo que dura um minuto. O termociclador executa 30-40 desses ciclos a fim de amplificar o DNA para verificar o vírus.

Testando contra controles

O DNA amplificado é testado contra um controle positivo, que geralmente consiste em genes do vírus clonados no plasmídeo, e um controle negativo, que é uma amostra 'conhecida' que teve um teste negativo para o vírus anteriormente.

A RNase P deve mostrar amplificação, o controle positivo deve ser positivo, o controle negativo deve ser negativo e, então, qualquer resultado obtido com a amostra é o resultado correto, disse o neurovirologista Dr. V Ravi. Para que um teste seja válido antes de o resultado ser divulgado, certos 'critérios de validade' devem ser atendidos.

Não perca de Explained | Como funciona o teste COVID-19

patrimônio líquido da família chrisley

Se o gene de manutenção (RNase P) for positivo, o controle positivo será positivo, o controle negativo será negativo e a amostra não apresentar nenhum resultado positivo de PCR, a amostra é declarada negativa para o RNA do vírus SARS-CoV-2. Se o resultado da PCR for positivo, o paciente tem COVID-19.

Compartilhe Com Os Seus Amigos: